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細(xì)胞名稱(chēng)H-4-II-E [H4-II-E](大鼠肝細(xì)胞瘤)

種屬大鼠

年齡(性別)

組織來(lái)源

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

背景描述H-4-II-E [H4-II-E]細(xì)胞可誘導(dǎo)產(chǎn)生芳香烴羥化酶，用于檢測(cè)環(huán)境樣品或食物提取物種皮克級(jí)的多氯聯(lián)苯有機(jī)化合物。

生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEM)+10% FBS+1% P/S

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%;CO2.5%溫度：37℃

大鼠肝細(xì)胞瘤當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開(kāi)，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過(guò)濾器。

高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如*和抗霉菌素如泰樂(lè)菌素時(shí)尤其重要。下面是*的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。

1 在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。

2 分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，**下列濃度，0.25.0.50.1.0.2.0.4.0.8.0 mg/ml。

3 每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。

4 確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代。

5 在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。

6 重復(fù)步驟4.

7 在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代，確定污染是否以已被消除。

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