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貨源介紹

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　　智立中特（武漢）生物科技有限公司主要致力于質粒微生物資源的保護、共享和持續利用，圍繞我國生命科學研究、生物技術創新和產業發展等重大需求，探索、發現、收集國內外的微生物資源，妥善長期保存管理；在保證生物安全和保護知識產權的前提下，為工農業生產、衛生健康、環境保護、科研教育提供質粒載體物物種資源、基因資源、信息資源和專業技術服務。旗下質粒載體網是一款提供質粒載體展示及定制的專業型網站，由智立中特（武漢）生物科技有限公司聯合多家企業公司科研院校共同打造！主要展示了各種基因類型下的質粒載體！

　　MSTO-211H細胞（提供STR鑒定報告）

　　（1）英文名稱：MSTO-211H

　　（2）中文名稱：人肺癌細胞

　　（3）細胞描述：MSTO-211H細胞株是1985年從一位肺二相間皮瘤患者的胸水中建株的。這個病人接受過多種藥物聯合前期化療。MSTO-211H細胞具有高親和力的EGF結合位點，并表達神經元特異性烯醇酶(NSE)及人絨毛膜促性腺激素(HCG)的α與β亞基。未檢測到左旋多巴胺脫羧酶(DDC)，邦巴辛與神經tensin。細胞過表達c-myc原癌基因，并沒有觀察到基因重排或擴增。V-src,v-abl,v-erbB,c-raf1,Ha-ras,Ki-ras,和N-ras的表達呈陽性。未檢測到N-myc,L-myc,c-myb。在本庫通過STR鑒定結果正確。

　　（4）規格：T25方瓶或1ml凍存管

　　（5）細胞數量：1×10^6

　　（6）組織來源：人肺癌

　　（7）生長方式：貼壁生長

　　（8）細胞形態：上皮型

　　（9）培養液：RPMI-1640+10%FBS+1%P/S

　　（10）培養條件：37℃，5%CO2

　　（11）運輸方式：常溫運輸（T25方瓶）或干冰運輸（凍存管）

　　細胞處理：

　　1）凍存細胞的復蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

　　3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

　　下面T25瓶為例；

　　1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

　　2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

　　3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。