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貨源介紹

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　　細胞名稱：人嗜酸性粒細胞HESP

　　產品規格：T25培養瓶x1；1.5ml凍存管x2

　　細胞數量：1x10^6；1x10^6

　　保存溫度：37℃；-198℃

　　運輸方式：常溫保溫運輸；干冰運輸

　　安全等級：1

　　用途限制：僅供科研3類

　　培養體系：DMEM(HYCLONE SH30022.01)+10%FBS+1%三抗

　　培養溫度：37℃

　　二氧化碳濃度：5%

　　簡介：人嗜酸性粒細胞HESP取自女性外周血，懸浮培養。

　　注釋：倍增時間35h

　　復蘇細胞收貨注意事項：

　　收到細胞后，靜置3小時，然后當天更換新鮮培養基！！！原瓶培養基不能繼續使

　　用！！！該細胞訂單用戶訂購前，需核實確認。

　　培養基貨號DMEM(HYCLONE SH30022.01或GIBCO C11965500BT）

　　胎牛血清（GIBCO 10099-141），必須與我們保持一致，如堅持使用不同貨號培養基或者血清培養，產生售后問題，不予支持補發。培養基正常pH值為7.2-7.4，顏色呈現微紅偏黃，若顏色發生偏差變化，需要盡快更換完全培養基。

　　凍存細胞收貨注意事項：

　　收到細胞后，當天存入-80℃冰箱或者-196℃的液氮罐中保存！！！該細胞訂單用戶訂購前，需核實確認（凍存細胞以收到細胞后起14天之內為售后保障期，不是保存多日開始復蘇后的14天之內）培養基貨號DMEM(HYCLONE SH30022.01或GIBCO C11965500BT）

　　胎牛血清（GIBCO 10099-141），必須與我們保持一致，如堅持使用不同貨號培養基或者血清培養，產生售后問題，不予支持補發。培養基正常pH值為7.2-7.4，顏色呈現微紅偏黃，若顏色發生偏差變化，需要盡快更換完全培養基。

　　常見問題：

　　1.運輸途中，細胞會因為晃動造成細胞脫落，此現象為正常現象，觀察后，靜置3小時。2.傳代后細胞漂浮原因：傳代前密度過大導致細胞擠出凋亡；消化過度；移液槍吹打力道過大。3.細胞復蘇后貼壁性不好，嘗試換液并血清提至15%，待觀察，若效果還不佳，需要聯系銷售及技術老師。4.本產品有添加支原體抗污染劑及三抗（青霉素，鏈霉素，兩性霉素B），若收到細胞后2天內，發現細胞污染，請立即聯系對應銷售進行補發；3-14天之內的污染，需要聯系對應銷售溝通并且核實詳情后，進行下一步售后處理。細胞復蘇操作說明（針對凍存細胞）實驗儀器：超凈工作臺，CO2培養箱，倒置顯微鏡，水浴鍋，離心機

　　實驗試劑：DMEM培養基，胎牛血清，三抗

　　實驗材料：T25細胞培養瓶，需復蘇的細胞，移液槍，槍頭，離心管

　　實驗步驟：

　　1.從液氮罐中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。

　　2.從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，移液槍吸出細胞懸液，加到離心管并滴加5倍以上完全培養基并混勻。

　　3.操作離心，調至1000轉/分，時長10分鐘

　　4.棄去上清液，重懸離心管底部細胞沉淀，在T25培養瓶中加入5-6ml完全培養基，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養。

　　5.次日更換一次培養液，繼續培養。

　　6.注意：凍存細胞建議三管一起復蘇到一個T25培養瓶中

　　細胞傳代操作說明（貼壁細胞）實驗儀器：超凈工作臺，CO2培養箱，倒置顯微鏡，離心機

　　實驗試劑：DMEM培養基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗

　　實驗材料：T25細胞培養瓶，需傳代的細胞，移液槍，槍頭，離心管

　　實驗步驟：

　　1.細胞于培養箱中，愈合度達到80%，可進行傳代。

　　2.按T25培養瓶計，吸出完全培養基，并PBS緩沖液輕沖3遍，添加0.25%含EDTA胰酶2ml，消化2min（具體時間視細胞而定），后用完全培養基將細胞沖洗下來。1000r/min離心10 min，棄上清收集細胞，鋪至2個T25培養瓶中培養，各添加7ml完全培養基。

　　3.注意：消化時間不易過長，消化前血清成分務必去除干凈，終止消化請用新鮮完全培養基，原瓶培養基不可繼續使用（終止消化或傳代）。細胞傳代操作說明（懸浮細胞）實驗儀器：超凈工作臺，CO2培養箱，倒置顯微鏡，離心機

　　實驗試劑：DMEM培養基，胎牛血清，三抗

　　實驗材料：T25細胞培養瓶，需傳代的細胞，移液槍，槍頭，離心管

　　實驗步驟：

　　1.細胞于培養箱中，密度達到懸浮細胞傳代標準（沉降后可鋪滿底面），可進行傳代。2.按T25培養瓶計，吹打均勻，吸出完全培養基，1000r/min離心10 min，棄上清收集細胞，鋪至2個T25培養瓶中培養，各添加7ml完全培養基。

　　3.注意：原瓶培養基不可繼續使用（傳代）。

　　細胞凍存操作說明

　　實驗儀器：超凈工作臺，CO2培養箱，倒置顯微鏡，離心機

　　實驗試劑：DMEM培養基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗，DMSO

　　實驗材料：T25細胞培養瓶，需凍存的細胞，移液槍，槍頭，離心管，凍存管，記號筆實驗步驟：

　　1.取待凍存的細胞（按T25計）用0.25EDTA胰酶2ml消化2min，用完全培養基將細胞沖洗下來。1000r/min離心10min，棄上清收集細胞。如果是懸浮生長的細胞，則可直接離心收集細胞。2.加入1ml凍存液(90%FBS+10%DMSO)制成細胞懸液。

　　3.細胞懸液裝入3支凍存管中。

　　4.凍存管在4℃下存放30 min，轉放-20℃1.5～2 h，再轉人-70℃4-12 h后即可轉移到液氮內(-196℃)，并登記。