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　　名稱E.G7-OVA(小鼠T淋巴瘤細胞)

　　別稱E.G7-Ova

　　種屬小鼠

　　組織來源T淋巴細胞

　　生長特性懸浮細胞

　　細胞形態(tài)淋巴母細胞樣

　　背景描述E.G7-OVA細胞是于1988年建系，源自C57BL/6(H-2b)小鼠的經(jīng)電轉(zhuǎn)質(zhì)粒pAc-neo-OVA(雞OVA基因)的淋巴細胞系EL4。

　　生物安全等級1

　　生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋0.05mMβ-mercaptoethanol＋0.4mg/ml G418＋10%FBS＋1%P/S

　　推薦傳代比例1×10^5-1×10^6個/ml

　　推薦換液頻率2~3次/周

　　凍存條件

　　凍存液：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

　　溫度：液氮

　　培養(yǎng)條件

　　氣相：空氣，95%；CO2，5%

　　溫度：37℃

　　抗原表達情況H-2 b

　　基因表達情況chicken ovalbumin

　　保藏機構(gòu)ATCC;CRL-2113

　　細胞處理：

　　1）凍存細胞的復(fù)蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

　　該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

　　1.收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

　　3.將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

　　下面T25瓶為例；

　　1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

　　2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

　　3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。