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貨源介紹

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　　MM.1S人多發(fā)性骨髓瘤細胞的母細胞株MM.1是從一位對類固醇療法產(chǎn)生抗藥性的多發(fā)性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1R對地塞米松耐藥。近緣細胞系MM.1S也是從MM.1中分離出來的，但對地塞米松敏感。該細胞復蘇后需要兩周左右才能恢復正常生長。

　　細胞特性

　　1）來源：人、女性、外周血

　　2）形態(tài)：成淋巴瘤細胞，懸浮和輕微的貼壁

　　3）含量：>1x10^6

　　4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

　　5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　6）用途：僅供科研使用。

　　運輸和保存

　　干冰運輸及復蘇好存活細胞

　?。?）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

　?。?）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

　　細胞接收后的處理

　　1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

　　2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

　　3）懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞在1000RPM條件下離心5min，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。

　　4）半貼細胞（或貼壁不牢細胞）：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在70%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮的細胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原來的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長到70%-90%可以對細胞進行傳代，在傳代過程中，需要收集T25瓶中懸浮的細胞離心后回收。

　　5）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

　　細胞培養(yǎng)步驟

　　一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

　　1）準備1640基礎培養(yǎng)基,優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%，P/S青霉素-鏈霉素1%

　　2）注意事項：

　　a.該細胞同時存在懸浮生長和輕微的貼壁狀態(tài)。

　　b.該細胞復蘇后需培養(yǎng)2周左右時間，才能恢復正常生長狀態(tài)。

　　c.細胞密度不可過高，在細胞匯合前進行傳代，否則容易成團。

　　3）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

　　參考傳代比例:1:3-1:6，參考換液頻率:2-3天

　　4）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　二．細胞處理：

　　復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度和拍照。

　　2細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

　　該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

　　1）懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下細胞密度維持在1×105~1×10^6個/mL（不同細胞對密度要求不同，具體可以參考細胞說明書）可以維持細胞的正常生長。懸浮細胞的收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2)．貼壁細胞的的消化，pbs清洗1-2次由于細胞貼壁不牢，pbs清洗過程中會有細胞脫落，所以pbs清洗液需要收集到離心管中。清洗后的貼壁細胞按正常的貼壁細胞處理。加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%血清的培養(yǎng)基來終止消化。

　　3）將收集到的懸浮細胞，消化下貼壁細胞和pbs清洗液中的細胞以1000rpm,5min離心重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3細胞凍存：收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。